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细胞重金属毒性指南检测

检测项目

细胞活力检测:

  • 细胞存活率:IC50值(MTT法参照ISO10993-5)
  • 增殖抑制率:ED50值(≥95%置信区间)
  • 克隆形成能力:集落数(直径≥50μm)
重金属离子分析:
  • 铅浓度:检出限≤0.1ppb(ICP-MS参照EPA6020B)
  • 汞含量:回收率85%-115%(冷原子吸收法)
  • 镉离子:线性范围0.5-100μg/L
氧化应激指标:
  • MDA含量:μmol/mg蛋白(TBA法参照GB/T5009.181)
  • SOD活性:U/mg蛋白(WST-1法)
  • GSH水平:nmol/mg蛋白(DTNB法)
细胞凋亡检测:
  • 凋亡率:AnnexinV阳性比例(流式细胞术)
  • caspase-3活性:RFU/min(荧光底物法)
  • DNA片段化:梯状条带强度(凝胶电泳)
基因表达分析:
  • MT1AmRNA:相对表达量(qPCR参照MIQE指南)
  • HSP70水平:foldchange≥2(RT-qPCR)
  • 抗氧化基因:SOD2表达量(Ct值差异)
蛋白质组学检测:
  • 差异蛋白:丰度变化(2D凝胶电泳)
  • 磷酸化状态:磷酸位点数(质谱法)
  • 蛋白互作:结合常数KD(SPR技术)
代谢组学检测:
  • LDH释放量:U/L(比色法参照ISO10993-5)
  • ATP水平:nmol/10^6细胞(荧光法)
  • 乳酸产量:mmol/L(酶电极法)
细胞周期分析:
  • G2/M期比例:百分比(PI染色流式术)
  • S期指数:BrdU阳性率
  • 有丝分裂阻滞:微核形成数(≥3个/细胞)
炎症因子检测:
  • IL-6浓度:pg/mL(ELISA参照GB/T34798)
  • TNF-α水平:ng/mL(多因子阵列)
  • NF-κB活化:核转位率(免疫荧光)
细胞膜完整性:
  • LDH漏出率:%对照(比色法)
  • 膜电位变化:荧光强度比(JC-1染色)
  • 渗透性:PI阳性细胞比例

检测范围

1.人类肝细胞系:检测重金属对肝脏代谢的影响,重点评估细胞色素P450活性和谷胱甘肽耗竭。

2.人类肾细胞系:关注重金属诱导的肾小管损伤,侧重检测氧化应激和凋亡指标。

3.小鼠胚胎成纤维细胞:评估发育毒性,重点分析细胞周期阻滞和基因突变频率。

4.鱼类鳃细胞培养物:检测水环境重金属污染,侧重膜完整性和离子通道功能。

5.植物根尖细胞:用于土壤污染评估,重点检测重金属积累和光合作用抑制。

6.环境水样中浮游细胞:监测水质毒性,侧重存活率和代谢活性变化。

7.食品样本中肠道细胞模型:评估重金属残留风险,重点检测炎症因子和屏障功能。

8.医疗器械接触细胞:针对医用材料溶出物,侧重细胞毒性和基因表达异常。

9.化妆品成分测试细胞:用于安全性评价,重点分析氧化应激和凋亡率。

10.药物筛选原代细胞:评估重金属解毒剂效果,侧重代谢组学和蛋白互作。

检测方法

国际标准:

  • ISO10993-5医疗器械生物学评价第5部分:细胞毒性试验
  • OECDTG455体外细胞基因突变试验方法
  • EPA6020B电感耦合等离子体质谱法测定痕量元素
  • ISO21427-1水质-体外微核试验
  • ISO19040-1水质-细胞毒性测试指南
国家标准:
  • GB/T16886.5医疗器械生物学评价第5部分:细胞毒性试验
  • GB/T5009.181食品中丙二醛的测定
  • GB/T34798细胞因子检测方法
  • GB/T5750.6生活饮用水标准检验方法重金属部分
  • GB/T15441水质急性毒性测定方法
方法差异说明:国际标准如ISO10993-5侧重MTT法终点判定,而国家标准GB/T16886.5允许CCK-8法替代;EPA6020B要求氩气纯度99.999%,GB/T5750.6允许99.99%;OECDTG455规定突变频率计算,GB标准采用类似但校准参数不同。

检测设备

1.倒置显微镜:NikonEclipseTi2(分辨率0.2μm,放大倍率40-400X)

2.流式细胞仪:BDFACSAriaIII(检测通道18个,流速12μL/s)

3.电感耦合等离子体质谱仪:Agilent7900(检出限≤0.1ppb,质量范围3-270amu)

4.原子吸收光谱仪:PerkinElmerPinAAcle900T(石墨炉温度3000℃,精度±0.5%)

5.荧光显微镜:OlympusBX53(激发波长365-640nm,CCD灵敏度0.01lux)

6.实时荧光定量PCR仪:Bio-RadCFX96(温控精度±0.1℃,通道数6)

7.酶标仪:ThermoMultiskanSky(波长范围340-850nm,孔间差≤1%)

8.细胞培养箱:ThermoScientificHeracellVIOS(CO2控制5±0.2%,温度37±0.5℃)

9.超低温冰箱:EppendorfCryoCubeF740(温度-86℃,容积740L)

10.离心机:Eppendorf5430R(转速30,000rpm,容量4x100mL)

11.生物安全柜:BakerSG403(气流速度0.5m/s,过滤效率99.99%)

12.分光光度计:ShimadzuUV-2600(波长精度±0.5nm,带宽1nm)

13.高效液相色谱仪:WatersACQUITYUPLC(压力上限18,000psi,流速0.001-5mL/min)

14.基因测序仪:IlluminaNovaSeq6000(通量20Breads/run,错误率≤0.1%)

15.细胞计数仪:CountstarIC1000(计数范围10^4-10^7/mL,精度±2%)

北京中科光析科学技术研究所【简称:中析研究所】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

细胞重金属毒性指南检测
其他检测

中析研究所可进行各种检测分析服务,包括不限于:标准试验,非标检测,分析测试,认证设计,产品验收,质量内控,矢量分析,内部控制,司法鉴定等。可出具合法合规、具有公信力的第三方检测报告。